4차 연속 PCR, 4차 블록 PCR, 유전자 합성 방법을 이용한 균주 특이적 바코드를 포함하는 유전자 적중 이형접합체 분열효모균주의 제조방법

Abstract

본 발명은 유전자적중(targeted gene deletion) 분열효모(Schizosaccharomyces pombe) 이형접합균주(heterozygous strains)를 체계적으로 제조하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로는 상동성재조합(homologous recombination)에 사용되는 결손카세트(deletion cassette)를 4차 연속 효소중합연쇄반응(4-round serial PCR), 4차 블록(block) PCR, 또는 유전자합성(total gene synthesis) 방법을 이용하여 효율적으로 제조하고, 이를 분열효모에 형질전환(transformation)하여 유전자적중 분열효모 균주를 제조하는 방법에 관한 것이다. 또한,본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 유전자 적중 분열 효모 이형접합 균주 및 유전자 적중 분열효모 이형접합 균주 라이브러리에 관한 것이다. 또한본 발명은 상기 라이브러리를 이용한 약물 작용점 탐색 방법 및 상기 라이브러리를 포함하는 신규약물 스크리닝에 관한 것이다.